Frontiers in Microbiology

Introducere

Măseaua este o boală virală caracterizată prin erupții cutanate sistemice, febră mare și simptome respiratorii și conjunctivale (Griffin, 2013). Dintre semnele fizice, petele Koplik de pe mucoasa bucală ar putea fi acceptate de pediatri și medici ca fiind un semn specific bolii „patognomonice” pentru rujeolă (Mason, 2011). Pata Koplik a fost introdusă de Henry E. Koplik în 1896 (Markel, 2015). Petele alb-albăstrui de pe mucoasa bucală din apropierea molarilor apar cu câteva zile înainte de apariția erupției cutanate caracteristice rujeolei. Prin urmare, semnul este extrem de util pentru diagnosticul precoce al rujeolei (Xavier și Forgie, 2015). Cu toate acestea, unele studii au sugerat că semnul ar putea să nu fie specific bolii (Annunziato, 1987; Evans et al., 1992). De exemplu, Evans et al. (1992) au raportat un caz de pete Koplik asociate cu infecția cu parvovirusul B19. Cu toate acestea, aceste rapoarte ar putea avea o limitare, cum ar fi numărul de pacienți.

Tehnologiile genetice recente, inclusiv metoda reacției în lanț a polimerazei (PCR), au permis detectarea diferitelor virusuri cu specificitate și sensibilitate ridicată. Folosind aceste metode, am analizat corelația dintre petele Koplik și virusurile detectate din peste 3000 de cazuri de pacienți suspectați de rujeolă, pe baza studiului național de 6 ani din Japonia.

Materiale și metode

Colectarea probelor

Din ianuarie 2009 până în septembrie 2014, datele de supraveghere națională a 5604 de cazuri de rujeolă, inclusiv cele diagnosticate clinic sau confirmate prin PCR, au fost furnizate de 74 de institute de sănătate publică ale guvernelor locale din întreaga Japonie. Cazurile diagnosticate clinic cu suspiciune de rujeolă trebuiau să fie raportate imediat guvernelor locale pe un formular oficial prescris al unui sistem național de supraveghere, cu un set de probe de tampon nazofaringian, sânge integral și urină, transmise institutelor locale de sănătate publică pentru analiza PCR. Din 5604 de cazuri, am exclus pacienții cu înregistrări neclare ale debutului bolii sau ale simptomelor, ale căror specimene au fost obținute la 8 zile după debutul bolii și cei care au furnizat doar un specimen din probele de tampon, ser sau urină pentru confirmarea PCR. În consecință, am înrolat 3023 de cazuri pentru analiza din acest studiu.

Astfel, cel puțin două probe de tampon, sânge și urină au fost obținute de la toți pacienții în termen de 7 zile de la debutul febrei. În plus, am efectuat o anchetă prin chestionar privind semnele clinice și evoluția bolii pentru a reevalua diagnosticul. Chestionarul a colectat informații privind vârsta, sexul, simptomele clinice, data debutului bolii, data prelevării de probe, tipul de specimen utilizat pentru PCR și agenții patogeni co-detectați, alții decât virusul rujeolei.

Detecția virusului

Detecția genei N a virusului rujeolei (MeV) a fost efectuată utilizând transcripția inversă-PCR (RT-PCR), așa cum a fost descrisă anterior (Morita et al., 2007; Taira et al., 2008). Pe scurt, genomurile virale au fost extrase cu ajutorul unui kit disponibil (QIAamp Viral RNA Mini Kit; Qiagen, Valencia, CA) și supuse testului RT-PCR. Seturile de amorsă pentru prima și nested PCR au fost descrise anterior (Morita et al., 2007). PCR a fost efectuată în următoarele condiții: 30 de cicluri la 98°C timp de 10 s, 53°C timp de 30 s, 72°C timp de 1 min. În plus, pentru a evita contaminarea încrucișată a genomului MeV, am efectuat fiecare test utilizând controlul negativ (fără genom viral) și controlul pozitiv pentru secvențele de digestie BamHI inserate de ARN sintetic artificial. În plus, am încercat în continuare să detectăm alți viruși care ar putea provoca erupții cutanate și febră în cazurile negative la rujeolă, inclusiv virusul rubeolei (RuV), herpesvirusul uman 6 și 7 și parvovirusul uman B19, utilizând PCR sau RT-PCR (Koch și Adler, 1990; Okuno et al., 1995; Tanaka-Taya et al., 1996; McIver et al., 2005; Organizația Mondială a Sănătății, 2007; Yasui et al., 2014). Amorsele sunt prezentate în tabelul suplimentar S1.

Declarație etică

Pentru a diagnostica rujeola, toate probele au fost colectate în primul rând în conformitate cu Legea privind prevenirea bolilor infecțioase și îngrijirea medicală a pacienților cu boli infecțioase din Japonia. A fost obținut consimțământul în cunoștință de cauză de la toți participanții, care a fost obținut de la subiecți sau de la reprezentanții lor legal acceptați pentru donarea de probe. Datele pacienților au fost anonimizate. Pentru a efectua un studiu străin (acest studiu) și din cauza lipsei consimțământului în cunoștință de cauză în scris, protocoalele prezentului studiu au fost deliberate de către Comitetul de etică pentru cercetări pe subiecți umani al Institutului de sănătate publică al prefecturii Gunma (Gunma, Japonia). În cele din urmă, acest studiu nu a avut nicio încălcare a drepturilor pacientului și a fost aprobat de comitetul de etică a cercetării (nr. aprobat H26-30056-18). În plus, toate metodele au fost efectuate în conformitate cu liniile directoare aprobate.

Rezultate

Date demografice ale cazurilor

Tabelul suplimentar S2 rezumă datele demografice ale cohortei de studiu. Toți pacienții au prezentat invariabil atât febră, cât și erupție cutanată, în timp ce petele Koplik au fost raportate la aproximativ 24% (717 cazuri) din totalul cazurilor. Istoricul vaccinării împotriva rujeolei a fost neclar în majoritatea cazurilor.

Detecția virusului și a petelor Koplik

Virusul rujeolei a fost detectat în aproape 28% (202 cazuri) din cazurile care au raportat pete Koplik (tabelul 1). RuV a fost detectat la aproximativ 17% (125 de cazuri) dintre pacienții care prezentau petele. În plus, alte virusuri, cum ar fi parvovirusul B19 și herpesvirusul uman 6/7, au fost detectate în aproximativ 7% (51 de cazuri). În plus, tabelul 1 prezintă virusurile detectate în cazurile care prezentau pete Koplik, dar MeV a fost negativ la testele PCR. Am observat codetecția RuV, a parvovirusului B19, a herpesvirusului uman 6/7 și a virusului RS în mai multe cazuri. În acest studiu, sensibilitatea și specificitatea petelor Koplik au fost de 48,0 și, respectiv, 80,2 % (tabelul suplimentar S3). În plus, ratele pozitive ale spoturilor Koplik la pacienții cu alte virusuri detectate au fost de aproximativ 20-30% (tabelul 2). Aceste constatări au sugerat că petele Koplik nu au fost o manifestare specifică a rujeolei.

TABEL 1

Tabel 1. Virusuri detectate la pacienții cu pete Koplik.

TABLĂ 2

Tabel 2. Asocierea dintre petele Koplik și virusurile detectate.

Discuție

Acest studiu se bazează pe datele naționale din Japonia obținute prin eforturile țării în vederea eliminării rujeolei, care au început în 2009. Estimarea anuală a cazurilor de rujeolă a raportat >10.000 de cazuri în Japonia până în 2008 (Centers for Disease Control and Prevention , 2008). În 2007, o epidemie majoră de rujeolă, care a fost raportată în principal la persoane în vârstă de adolescență și douăzeci de ani, a determinat guvernul japonez să stabilească obiective pentru eliminarea rujeolei și să acționeze pentru a-și consolida politica de vaccinare (Morita et al., 2007; Centers for Disease Control and Prevention , 2008). În plus, politica de supraveghere a fost consolidată, trecând de la un sistem de anchetă santinelă la un sistem de anchetă a tuturor cazurilor în 2008. În continuare, confirmarea de laborator prin utilizarea testelor PCR a fost introdusă în 2008 și extinsă la toate cazurile suspecte de rujeolă în 2010. În consecință, rezultatul a fost remarcabil. În cele din urmă, OMS a aprobat eliminarea bolii în martie 2015 în Japonia.

Până în anii 1970 sau 1980, rujeola a fost diagnosticată în principal în funcție de semnele fizice și de evoluția clinică și a fost ocazional confirmată prin legături epidemiologice. În mod obișnuit, după 2-3 zile de la prezentarea simptomelor respiratorii și a febrei, apare erupția maculopapulară la nivelul feței și se extinde la nivelul trunchiului și al extremităților. Această erupție este o caracteristică distinctă a rujeolei, fiind o constatare utilă pentru diagnostic. Cu toate acestea, pacienții cu rujeolă care au primit vaccin adesea nu prezintă erupția tipică (Leung et al., 2018). Diagnosticul rujeolei poate fi dificil în zonele cu incidență scăzută și acoperire vaccinală ridicată (Leung et al., 2018). Astfel, în prezent, metoda RT-PCR asigură detectarea directă și incontestabilă a virusului rujeolei în probele umane. Un set de teste PCR de ser, urină și tampon de gât, dacă sunt obținute în timp util și în mod adecvat, de la debutul febrei până în ziua 7 a bolii, oferă o dovadă concretă a infecției. În cazul în care toate rezultatele PCR sunt negative, rujeola poate fi exclusă cu cea mai mare certitudine. În plus, am investigat și alte virusuri în cazurile MeV-negative. Prin aceste investigații suplimentare, au fost detectate RuV, herpesvirusul, parvovirusul și alte câteva virusuri care ar putea provoca erupții cutanate și sindrom febril (tabelul 1), demonstrând că petele Koplik ar putea apărea nu numai în rujeolă, ci și în alte infecții virale, cum ar fi rubeola, deși specificitatea acestui semn clinic a fost relativ ridicată (aproximativ 80%).

Marca Koplik care este asociată cu infecția cu virusul rujeolei poate fi atribuită distrugerii celulelor epiteliale glandulare și flebectasiei din jurul canalului glandular submucos (Xavier și Forgie, 2015). În schimb, erupția datorată infecției cu virusul rubeolei este cauzată de o dermatită perivasculară superficială (Won et al., 2001). Din punct de vedere patologic, inflamația perivasculară bazată pe limfocite este în concordanță cu rujeola. Prin urmare, fiziopatologia rubeolei și a rujeolei poate fi similară. Pe baza acestor constatări, petele Koplik pot fi, de asemenea, observate la persoanele cu infecție rubeolică, deși nu au fost efectuate studii despre constatările patologice ale enantemelor datorate rubeolei (Cherry, 2004).

În continuare, nu am putut obține fotografii ale petelor Koplik. Prin urmare, nu a fost validat dacă au existat diferențe în cazul petelor Koplik datorate virusurilor. Pentru a cunoaște mai multe informații în acest sens, trebuie efectuate studii suplimentare.

Pentru medicii și pediatrii experimentați, în special, diagnosticarea unui caz tipic de rujeolă este relativ ușoară și precisă, chiar și fără confirmare de laborator. Cu toate acestea, medicii cu experiențe de tratare a rujeolei pot scădea în numeroasele țări în care a fost aprobată eliminarea bolii, inclusiv în Japonia. Între timp, rujeola modificată poate crește în viitorul apropiat, deoarece acoperirea vaccinală a rujeolei a fost crescută. Astfel, ar putea deveni mai dificilă diagnosticarea rujeolei doar prin constatări clinice, cum ar fi petele Koplik. În concluzie, acest studiu sugerează că diagnosticul rujeolei sau al altor infecții virale ar trebui să se bazeze nu numai pe informațiile colective ale manifestărilor clinice, ci și pe confirmarea de laborator.

Contribuții ale autorilor

HK și KK au conceput studiul. KS, MT, MK, MK, HT, HT, KO, KN, NO și HM au analizat datele. MK, HT și HK au contribuit cu instrumente analitice. HK, KK și AR au redactat manuscrisul.

Finanțare

Această lucrare a fost susținută de un proiect comandat pentru Cercetarea privind bolile infecțioase emergente și reemergente de către Agenția Japoneză pentru Cercetare și Dezvoltare Medicală, AMED (Granturile nr. 18fk0108013h0703 și 18fk0108019h0203).

Declarație privind conflictul de interese

Autorii declară că cercetarea a fost efectuată în absența oricăror relații comerciale sau financiare care ar putea fi interpretate ca un potențial conflict de interese.

Recunoștințe

Le mulțumim doctorilor Hiroto Shinomiya, Tetsuo Kase și tuturor membrilor Comitetului de control al infecțiilor din cadrul Asociației Institutelor de Sănătate Publică a Guvernelor Locale din Japonia. Dr. Katsuhiro Komase și Yoshio Mori de la Institutul Național de Boli Infecțioase pentru discuții utile. De asemenea, mulțumim întregului personal al institutelor de sănătate publică ale guvernelor locale care a contribuit la confirmarea de laborator pentru proiectul de eliminare a rujeolei în Japonia și, de asemenea, pentru că a răspuns la chestionarul din acest studiu.

Material suplimentar

Materialul suplimentar pentru acest articol poate fi găsit online la adresa: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2019.00269/full#supplementary-material

Annunziato, D. (1987). Petele Koplik și virusul eco 9. N. Y. State J. Med. 87:667.

PubMed Abstract | Google Scholar

Centers for Disease Control and Prevention (2008). Progresul spre eliminarea rujeolei-Japonia, 1999-2008. MMWR Morb. Mortal. Wkly. Rep. 57, 1049-1052.

Google Scholar

Cherry, J. D. (2004). „Virusul rubeolei”, în Textbook of Pediatric Infectious Diseases, 5th Edn, eds R. D. Feigin, J. D. Cherry, G. J. Demmler, și S. L. Kaplan (Pennsylvania, PA: Saunders), 2134-2162.

Evans, L. M., Grossman, M. E., și Gregory, N. (1992). Pete Koplik și o erupție purpurică asociată cu infecția cu parvovirus B19. J. Am. Acad. Dermatol. 27, 466-467. doi: 10.1016/S0190-9622(08)80888-21

PubMed Abstract | Textul integral | Google Scholar

Griffin, D. E. (2013). „Measles virus,” în Fields Virology, 6th Edn, eds D. M. Knipe și P. M. Howley (Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins), 1042-1069.

Koch, W. C., și Adler, S. P. (1990). Detectarea ADN-ului parvovirusului uman B19 prin utilizarea reacției în lanț a polimerazei. J. Clin. Microbiol. 28, 65-69.

Google Scholar

Leung, A. K., Hon, K. L., Leong, K. F., și Sergi, C. M. (2018). Rujeola: o boală adesea uitată, dar nu dispărută. Hong Kong Med. J. 24, 512-520. doi: 10.12809/hkmj187470

PubMed Abstract | Full Text | Google Scholar

Markel, H. (2015). Petele lui Koplik: prevestitorul unei epidemii de rujeolă. Milbank Q. 93, 223-229. doi: 10.1111/1468-0009.12113

PubMed Abstract | Text integral | Google Scholar

Mason, W. H. (2011). „Measles,” în Nelson Textbook of Pediatrics, 19th Edn, eds R. M. Kliegman, B. F. Stanton, J. W. III St. Geme, N. F. Schor, și R. E. Behrman (Philadelphia, PA: Saunders Elsevier), 1069-1075. doi: 10.1016/B978-1-4377-0755-7.00238-4

CrossRef Full Text | Google Scholar

McIver, C. J.., Jacques, C. F., Chow, S. S., Munro, S. C., Scott, G. M., Roberts, J. A., et al. (2005). Dezvoltarea de PCR multiplex pentru detectarea agenților patogeni virali comuni și a agenților de infecții congenitale. J. Clin. Microbiol. 43, 5102-5110. doi: 10.1128/JCM.43.10.5102-5110.2005

PubMed Abstract | CrossRef Full Text

Morita, Y., Suzuki, T., Shiono, M., Shiobara, M., Saitoh, M., Tsukagoshi, H., et al. (2007). Analiza secvențială și filogenetică a genei nucleoproteinei (N) în virusurile rujeolei predominante în Gunma. Japonia, în 2007. Jpn. J. Infect. Dis. 60, 402-404.

PubMed Abstract | Google Scholar

Okuno, T., Oishi, H., Hayashi, K., Nonogaki, M., Tanaka, K., and Yamanishi, K. (1995). Herpesvirușii umani 6 și 7 în cervixul femeilor însărcinate. J. Clin. Microbiol. 33, 1968-1970.

Google Scholar

Taira, K., Nakamura, M., Okano, S., Nidaira, M., Kudaka, J., Itokazu, K., et al. (2008). Analiza filogenetică a genei nucleoproteinei (N) a virusurilor rujeolei prevalente în Okinawa, Japonia, în perioada 2003-2007. Jpn. J. Infect. Dis. 61, 248-250.

PubMed Abstract | Google Scholar

Tanaka-Taya, K., Kondo, T., Mukai, T., Miyoshi, H., Yamamoto, Y., Okada, S., et al. (1996). Studiu seroepidemiologic al herpesvirusului uman-6 și -7 la copii de diferite vârste și detectarea acestor două virusuri în tampoane de gât prin reacția în lanț a polimerazei. J. Med. Virol. 48, 88-94. doi: 10.1002/(SICI)1096-9071(199601)48:1<88::AID-JMV14>3.0.CO;2-2

PubMed Abstract |Ref Full Text | Google Scholar

Won, J. Y., Jeon, Y. M., și Song, E. S. (2001). Un studiu clinic și histopatologic al rubeolei. Korean J. Dermatol. 39, 155-160.

Google Scholar

Organizația Mondială a Sănătății (2007). Manual pentru diagnosticul de laborator al infecției cu virusul rujeolei și rubeolei, 2nd Edn. Geneva: OMS.

Google Scholar

Xavier, S., și Forgie, S. E. (2015). Petele Koplik revizuite. CMAJ 187:600. doi: 10.1503/cmaj.141656

PubMed Abstract | Full Text | Google Scholar

Yasui, Y., Mori, Y., Adachi, H., Kobayashi, S., Yamashita, T., și Minagawa, H. (2014). Detectarea și genotiparea virusului rubeolei de la pacienții exantematici suspectați de rujeolă utilizând transcripția inversă-PCR. Jpn. J. Infect. Dis. 67, 389-391. doi: 10.7883/yoken.67.389

PubMed Abstract | Full CrossRef Text | Google Scholar

.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.